Introdução
Os reguladores de crescimento das plantas sintetizados pelas plantas são necessários para o seu crescimento e desenvolvimento. Mas, para induzir a mesma resposta dentro de um laboratório em condições artificiais, requer a adição de reguladores de crescimento de plantas exógenos à mídia.
Hoje, vários reguladores de crescimento de plantas naturais e sintéticos (PGRs), hormônios vegetais, ou fitormônios estão disponíveis para uso em experimentos de cultura de tecidos. Mas como preparar uma solução de PGRs é um problema ou confusão mais comum enfrentado por nossos culturistas!
Então, neste artigo, cobrimos como preparar a solução estoque de reguladores de crescimento de plantas e a solução estoque de NaOH (solvente) necessária para dissolver o hormônio em pó.
Como preparar uma solução estoque de PGRs?
Para preparar a solução estoque de qualquer regulador de crescimento vegetal, siga as etapas abaixo:
- Pegue 50 ml de tubo falcon para cada hormônio para o qual você deseja preparar o caldo.
- Identifique cada tubo adequadamente com o nome do hormônio.
- Para preparar solução de trabalho de hormônio de crescimento vegetal 1mg / L, preparar 1g / L de solução com água.
- No vídeo, estamos medindo 0,05 grama (50 mg) da forma em pó do hormônio para preparar uma solução estoque de 50 ml.
- Você pode usar um copo e uma espátula para medir cada regulador de crescimento de planta. Mas, você deve trocar o copo e limpar ou trocar a espátula toda vez que medir outro regulador de crescimento de planta para evitar qualquer contaminação cruzada de suas soluções estoque.
Nota:De uma garrafa de 100 gramas de reguladores de crescimento de plantas da PCT, você pode preparar 100 litros de solução estoque. Contudo, você só precisa de 1 ml de solução estoque para fazer 1 litro de mídia. Então, no geral, você pode preparar 100 mil litros de mídia por garrafa.
- A próxima etapa é dissolver a forma em pó do regulador de crescimento. Não se dissolve diretamente na água, então você precisa de um solvente.
- Use NaOH como solvente para dissolver a forma em pó do regulador de crescimento.
- Usando uma micropipeta, meça 1ml de NaOH e adicione-o ao tubo falcon de 50ml contendo o regulador de crescimento em pó. Misture bem e mude as pontas da pipeta antes de começar a misturar os próximos reguladores de crescimento para evitar qualquer contaminação cruzada entre os hormônios (se você estiver preparando uma solução estoque de hormônio vegetal de mais de um hormônio).
Você também pode usar o agitador pequeno ou agitar o tubo ou frasco para dissolver o hormônio em pó no solvente.
Nota:O procedimento para preparar NaOH 1M é fornecido abaixo. Então, tome 1ml NaOH da solução 1M preparada para dissolver os reguladores de crescimento das plantas.
- Em seguida, adicione 49 ml (porque você já adicionou 1 ml de NaOH para dissolver o hormônio em pó) de água destilada usando uma pipeta para fazer 50 ml da solução estoque do hormônio.
- Então, é hora de esterilizar a solução estoque, pois eles não são estéreis. Você deve saber sobre o seu hormônio se ele é resistente ao calor ou não.
- Se o hormônio não for resistente ao calor, então, você precisa filtrar a solução com seringa após a mídia ter resfriado a pelo menos 60 graus Celsius e se for resistente ao calor, então você pode autoclave a solução.
- Então, sua solução de estoque está pronta para uso em seu experimento. Você pode diluí-lo para trazê-lo à concentração desejada.
Como preparar a solução de NaOH 1M?
O hidróxido de sódio (NaOH) é usado para aumentar o pH do meio de cultura ou dissolver a forma em pó do regulador de crescimento.
- Para preparar a solução estoque de NaOH, você precisa de pellets de NaOH, uma espátula, Frasco Erlenmeyer.
- Adicione 100 ml de água destilada ao Erlenmeyer usando a pipeta.
- Para fazer uma solução molar de NaOH, você precisa da fórmula:
Molaridade =não. de moles de soluto / 1 litro
E, um mole de hidróxido de sódio =40 gramas
Então, se você quiser preparar 1M de solução de NaOH, você precisa de 40 gramas de NaOH dissolvidos em 1L da solução.
Mas, aqui estamos preparando apenas 100 ml da solução estoque, então para isso, você só precisa de 4 gramas de NaOH dissolvidos em 100 ml de água.
- Meça 4 gramas de NaOH usando uma espátula em uma balança.
- Adicione os pellets de NaOH medidos à água e, usando um agitador, torne-a uma solução homogênea.
- Depois que os pellets são dissolvidos, transfira a solução para o frasco de armazenamento.
- Sua solução de NaOH 1 molar está pronta para uso em seus experimentos.
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