Introdução
O encanto foliar, o padrão de variação e textura da folha, e sua tolerância à luz solar limitada tornam as Alocasias uma das plantas mais populares entre os jardineiros paisagistas e coletores de plantas.
Alocasia compreende cerca de 100 espécies e é um gênero morfologicamente diverso na família Arecaceae. Os membros são amplamente usados para diversos fins. Suas folhas, raízes, e o caule são usados para fins comestíveis em alguns lugares, e a planta Taro Gigante tem muitas propriedades medicinais, incluindo antidiarreica, antifúngico, e propriedades antiinflamatórias.
As propriedades medicinais e a beleza da planta a tornam muito procurada pelas pessoas. A demanda altíssima por essas plantas em espaços comerciais levou os cientistas a encontrar uma alternativa melhor para atender à demanda do mercado. E, As ferramentas de cultura de tecidos têm se mostrado excelentes técnicas para cumprir todas as finalidades mencionadas.
Este artigo apresenta uma descrição do Alocasia gêneros e seus membros e mais, ele o levará para a cultura de tecidos desta planta e seu procedimento.
Sobre a planta
Alocasia é um gênero com espécies de plantas com flores perenes tuberosas com folhas largas e rizomas. As plantas normalmente crescem de 2-6 'de altura.
As folhas das plantas têm caules longos, em forma de ponta de flecha a em forma de coração que são decoradas e adornadas com cores em diferentes tamanhos, de 8 ”a 36” de comprimento, dependendo da espécie. As plantas são comumente chamadas de orelhas de elefante devido à semelhança de suas folhas com grandes orelhas de elefante.
Eles são nativos das florestas tropicais, locais de vegetação secundária, e ao longo de riachos ou lugares pantanosos da Índia, Sudeste da Ásia, e o sul da China através das ilhas do Pacífico Sul (em particular as Filipinas, Ilhas Carolinas, e Indonésia) para a Austrália Oriental.
Alocasia tem sido o auge da moda para jardineiros, culturistas, e coletores de plantas por mais de 150 anos. Essas plantas são coletadas e vendidas em grande escala para atender à escala comercial.
A existência de várias espécies do gênero está ameaçada devido à contínua coleta e destruição do habitat. A pressão de proteção dessas plantas pode ser aliviada pelo uso de técnicas de micropropagação in vitro.
Cultura de tecidos de Alocasia
A cultura de tecidos tem sido uma ferramenta biotecnológica essencial em laboratórios de plantas devido ao seu grande potencial para a propagação de plantas medicinais de alto valor, fabricação de produtos naturais de alta qualidade, e produção rápida e em massa de plantas.
É a melhor alternativa para a produção de metabólitos de plantas medicinais importantes, multiplicação rápida de espécies raras ou ameaçadas, produção de plantas livres de doenças, e transformação planta-genoma.
Muitas empresas têm usado a técnica de cultura da ponta do broto para produzir muitos clones de aróides livres de doenças desde 1974 (Hartman).
Aqui, um procedimento para a cultura de tecidos de Alocasia longiloba usando sementes foi abordado, que é retirado do estudo de Abdulhafiz, F., Maomé, UMA., Kayat, F., Zakaria, S., Hamzah, Z., Reddy Pamuru, R., Hamzah Z., Reduan, M. F. H. (2020). Micropropagação de Alocasia longiloba Miq e propriedades antioxidantes comparativas de extratos etanólicos da planta cultivada no campo, Calo Propagado In Vitro e Derivado In Vitro. Plantas, 9 (7), 816. doi:10.3390 / plants9070816
Procedimento
- Material de planta e preparação de sementes:
- Colete os frutos de A.longoliba e lave-os em água corrente seguida de enxágue em água destilada estéril para remover a poeira completamente. Então, separe as sementes cuidadosamente à mão e seque-as à temperatura ambiente durante duas semanas.
- Teste de Viabilidade de Semente:
- Imbibe algumas (100 ou mais) sementes em água destilada estéril por 18 h a 25 ± 2 ° C para amolecer o tegumento e ativar os sistemas enzimáticos.
- Mergulhe as sementes em solução de tetrazólio a 1% (pH 7,0 ± 2) e incube a 45 ° C por 6 h no escuro.
- No final do período de incubação, lavar as sementes com água destilada esterilizada e observar ao microscópio a alteração da cor. Então, calcular a porcentagem de viabilidade como o número de embriões corados / nº total. de embriões multiplicado por 100.
- Esterilização da superfície da semente:
- Lave as sementes secas de A. longiloba sob água corrente da torneira por 30 min.
- Esterilize a superfície as sementes com uma concentração de 40% de Clorox (hipoclorito de sódio 5,25%) com algumas gotas de tween-20.
- Agite as sementes em um agitador orbital a 80 rpm por 20 min.
- Lave as sementes esterilizadas com água destilada estéril para remover vestígios de Clorox e, em seguida, seque no estudo de filtro Whatman esterilizado (90 mm).
- Tratamento pré-germinativo:
Para quebrar a dormência das sementes e maximizar a germinação delas, siga o procedimento para tratar sementes:
- Escarificar as sementes com ácido sulfúrico a 30% (H2SO4) por 15 min e depois enxaguar em água destilada por 10 min para remover vestígios de solução ácida.
- Esterilize-os à superfície com Clorox 40% por 20 min e depois lave com água destilada estéril três vezes a cada vez por 1 min.
- Cultive as sementes em um meio que consiste em meio MS, suplementado com 30 g L-1 de sacarose, 2,78 g L − 1 Gelrite sem regulador de crescimento vegetal.
- Ajuste o pH para 5,7 ± 0,2 antes de adicionar ágar e depois autoclavado a 121 ° C a 103 kPa por 20 min.
- Incubar as culturas a 25 ± 2 ° C com fotoperíodo de 16 h fornecido por luzes fluorescentes brancas frias.
- Indução e multiplicação de brotos in vitro:
- Use as sementes cultivadas in vitro com quatro semanas de idade neste estágio.
- Remova o cotilédone, hipocótilo, e a raiz com cuidado.
- Inocular a ponta do caule de cerca de 2-3 cm em meio MS suplementado com citocinina 6-benzilamino purina (BAP), a 3 mg L − 1.
- Tratar as sementes com ácido sulfúrico a 30% por 15 min, seguido de esterilização de superfície com Clorox a 40% por 20 min.
- Em seguida, lave os explantes com água destilada estéril para remover o vestígio de Clorox.
- Inocular as sementes desinfetadas assepticamente em um frasco contendo aproximadamente 25 mL de meio (meio MS suplementado com 3 mg L-1 IAA) para indução de calosidades.
- Incubar as culturas a 25 ± 2 ° C sob luz fluorescente fria com um ciclo de luz / escuridão de 16/8 h.
- Para enraizamento in vitro:
- Cultivar os brotos isolados (2–3 cm) de múltiplas culturas de brotos em potes de vidro contendo 20 mL de meio MS suplementado com ácido indol-3-acético a 0,5 mg L-1, suplementado com 30 g L − 1 de sacarose e 8 g L − 1 de ágar sob fotoperíodo claro / escuro de 16/8 h.
- Após 4 semanas, retire cuidadosamente as mudas bem crescidas com raízes (8–9 cm de altura) dos recipientes de cultura e lave bem com água corrente da torneira.
- Então, enxágue as raízes com água para remover o meio de ágar.
- Manter as mudas na sala de cultivo com temperatura de 25 ± 2 ° C por 5 dias antes de serem transferidas para a estufa.
- Depois de cinco dias, plante as mudas em um pequeno vaso de plástico de 20 × 15 cm contendo um meio de solo com uma combinação de solo superficial e musgo de turfa na proporção de 1:2.
Continue observando sua planta e registre seu crescimento e observe quaisquer mudanças negativas para tomar ações instantâneas antes que suas culturas sejam completamente estragadas.
E, se este protocolo funcionar para você, informe-nos em [email protected].
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