pelo Dr. Karthik Masagounder, Head Aqua and Swine Research, Evonik Nutrition and Care GmbH, Alemanha e Dr. D Allen Davis, Professor, Auburn University, EUA
Um estudo in vitro baseado nas enzimas extraídas do hepatopâncreas de camarão mostrou que os camarões são capazes de clivar completamente os quatro isômeros disponíveis de DL-metionil-DL-metionina (AQUAVI® Met-Met), mas em taxas diferentes. Isso permite a liberação e absorção retardadas de D- e L-Metionina (Met) no trato digestivo. Contudo, nenhum dado in vivo foi publicado mostrando mudanças no perfil pós-prandial de Met na hemolinfa - um fluido análogo ao sangue em vertebrados - de camarões alimentados com diferentes fontes de Met.
Portanto, instigamos um estudo para investigar e comparar os níveis pós-prandiais de Met em relação a outros aminoácidos na hemolinfa de camarões de perna branca alimentados com dietas suplementadas com AQUAVI® Met-Met ou DL-Met. Os efeitos de diferentes fontes sobre os níveis de Met da hemolinfa de camarão foram avaliados sob duas frequências de alimentação (uma vez por dia e três vezes por dia) para entender se a frequência de alimentação influenciaria os efeitos da dieta sobre os níveis de hemolinfa de Met.
Met é normalmente o primeiro aminoácido limitante na alimentação prática de camarões e, portanto, sua suplementação é essencial. Estudos anteriores mostraram que AQUAVI® Met-Met é uma fonte de Met mais eficiente (≥ 200%) para camarões em comparação com DL-Met (Xie et al. 2017; Niu et al. 2018). A melhor biodisponibilidade de AQUAVI® Met-Met versus DL-Met é atribuída principalmente a (i) sua menor solubilidade em água e lixiviação e (ii) liberação lenta e longa de Met de diferentes estereoisômeros (DL-Met-Met, LD-Met-Met, LL-Met-Met, DD-Met-Met).
Projeto de ensaio para testar diferentes fontes de metionina e frequências de alimentação
A dieta basal foi formulada para conter ~ 37 por cento de proteína usando farelo de soja como fonte primária de proteína, e 8% de lipídios e ~ 20 MJ / kg de energia bruta usando trigo e óleo de peixe como principais fontes de energia. A dieta basal foi formulada para atender às necessidades nutricionais conhecidas do camarão de perna branca, com exceção do Met. Duas dietas de teste foram formuladas substituindo 0,30% de glicina da dieta basal por 0,30% de DL-Met (dieta DL-Met) ou 0,31% de AQUAVI® Met-Met (dieta Met-Met).
Todas as dietas foram peletizadas sob pressão usando um moedor de carne e um molde de 3 mm no laboratório de alimentação da Auburn University. Após a peletização, as dietas foram secas até um teor de umidade de 8-10 por cento e armazenadas a 4 ° C. Os níveis de Met e de outros aminoácidos analisados nas três dietas apresentaram valores próximos aos planejados.
No primeiro teste, 54 tanques, cada tanque contendo quatro camarões (peso corporal médio de ~ 17g), foram usados. Cada dieta foi oferecida a 18 tanques (volume de 80l) no total. Isso permitiu amostras triplicadas de hemolinfa (uma amostra de hemolinfa agrupada de quatro camarões por tanque) em cada ponto de tempo por seis pontos de tempo (0, 15, 30, 45, 60 e 120 min) para cada grupo dietético (três repetições x seis momentos x três dietas =54 tanques). Nenhum tanque foi amostrado mais de uma vez. Os camarões foram pré-condicionados às dietas experimentais com uma alimentação por dia durante quatro dias antes da amostragem da hemolinfa.
A alimentação para os diferentes tanques foi escalonada entre 8 e 10 da manhã para permitir tempo para as amostragens em diferentes tanques nos pontos de tempo almejados. Antes do dia da amostragem, os camarões foram mantidos em jejum durante a noite e as amostras de hemolinfa basal foram retiradas de três tanques em cada grupo de dieta no minuto zero antes da alimentação. Aos camarões dos tanques restantes foi oferecido um excedente das respectivas dietas experimentais por 15 minutos, tanques foram sifonados para remover qualquer excesso de alimentação, e os camarões foram mantidos em jejum durante a coleta da hemolinfa.
No julgamento dois, os camarões foram acondicionados às dietas por quatro dias antes da coleta da hemolinfa. Cada dieta foi oferecida a 15 tanques (80l de volume) contendo quatro camarões (~ 21g de peso corporal médio) por tanque. A primeira alimentação para diferentes tanques foi escalonada entre 7h e 9h30 para acomodar as amostragens de hemolinfa no dia da amostragem nos pontos de tempo almejados. Foi dado um intervalo de três horas entre as duas refeições do dia. Amostras de hemolinfa de tanques triplicados de camarão foram planejadas após a terceira refeição até 60 min para cada intervalo de 15 min.
No quinto dia, camarões em jejum durante a noite foram alimentados duas vezes cada, com duração de uma hora, seguindo o mesmo esquema de alimentação dos dias anteriores. Após cada alimentação, tanques foram sifonados para qualquer alimento não consumido e os camarões foram mantidos em jejum por duas horas. Antes da terceira alimentação, Amostras de hemolinfa basal foram coletadas no minuto zero de três tanques. Aos camarões dos tanques remanescentes foi oferecido um excedente das respectivas dietas por 15 minutos e, posteriormente, jejuado durante as amostras subsequentes. Amostras de hemolinfa foram coletadas aos 15, 30, 45, e 60 min, cada vez de tanques triplicados de camarão em cada grupo de tratamento.
As amostras de hemolinfa coletadas foram centrifugadas e decantadas para obter amostras de aminoácidos livres. As amostras foram então liofilizadas e analisadas quanto ao teor de aminoácidos individuais.
Quantidade absoluta de Met e aminoácidos totais (TAA) foram avaliados para cada tratamento dietético e momentos. A fim de eliminar a influência da variação na quantidade de ração consumida por camarão individual nos níveis de Met em um determinado momento, O nível de Met foi expresso em porcentagem do TAA medido. Este valor foi então comparado entre os tratamentos e diferentes momentos para as duas diferentes frequências de alimentação. Os dados foram submetidos a ANOVA de duas vias para medir os efeitos das dietas e diferentes pontos de tempo na hemolinfa TAA (μg / ml) e nos níveis de Met (μg / ml, (% TAA) de camarão. Adicionalmente, combinando os dados de teste, O nível de hemolinfa Met (% TAA) também foi submetido a ANOVA de três fatores para avaliar os efeitos da dieta, tempo e frequência de alimentação (o ponto de tempo 120 min foi excluído para 1 alimentação).
Durante o estudo, a temperatura da água foi mantida a cerca de 30 ° C. O oxigênio dissolvido foi mantido próximo à saturação usando pedras de ar em cada aquário e o tanque de depósito usando uma linha de ar comum conectada a um soprador regenerativo. A salinidade da água foi mantida em cerca de nove ppt.
Impactos da dieta (fontes de metionina), tempo pós-alimentação e frequência de alimentação na hemolinfa
Os resultados dos efeitos principais e de interação das dietas e do tempo sobre os níveis de aminoácidos da hemolinfa de camarão estão resumidos na Tabela 2. No ensaio um, onde camarões eram alimentados uma vez por dia, dieta afetou apenas os níveis de hemolinfa Met (μg / ml, % TAA), mas não TAA. Os níveis de TAA e Met foram afetados pelo tempo. Contudo, nenhum efeito de interação devido à dieta e ao tempo foi detectado no TAA ou Met. Os níveis de hemolinfa Met foram maiores em camarões alimentados com dieta Met-Met em relação à dieta basal (μg / ml) ou ambas as dietas basal e DL-Met (% TAA). O nível de hemolinfa Met expresso em% TAA apresentou níveis mais elevados na hemolinfa para a dieta DL-Met do que para a dieta basal. Em todas as dietas, Níveis de Met e TAA na hemolinfa de camarão medidos a 15, 30 e 45 minutos após a alimentação foram geralmente mais elevados do que aqueles medidos em outros pontos de tempo (0, 60 e 120 min).
No julgamento dois, onde camarões eram alimentados três vezes por dia, A quantidade absoluta de TAA e níveis de Met (μg / ml) na hemolinfa de camarão mostraram efeitos de interação devido à dieta e ao tempo (ver Tabela 2). Contudo, nenhuma tendência particular pode ser detectada devido à interação dieta x tempo. Além disso, a comparação post-hoc tukey não mostrou diferenças significativas entre quaisquer combinações de médias. As variações no pico dos níveis de aminoácidos dentro dos grupos dietéticos ao longo do tempo foram prováveis devido às diferenças no consumo de ração entre os indivíduos. O grau de saciedade entre os indivíduos parece variar mais quando os camarões são alimentados com mais freqüência.
O exame dos níveis de hemolinfa Met como% TAA corrige parcialmente os efeitos de confusão das variações na ingestão de alimentos sobre os efeitos da dieta. Os níveis de Met em% TAA mostraram efeitos devido à dieta ou tempo sem interação entre eles. Os níveis de Met (% TAA) foram maiores em camarões alimentados com dieta Met-Met do que aqueles alimentados com dieta basal, enquanto camarões alimentados com dieta DL-Met mostraram níveis intermediários de Met não significativos. Os níveis de Met (% TAA) atingiram seu pico 15 minutos após a alimentação e diminuíram com o tempo. Efeitos de tempo semelhantes também foram observados nos níveis de TAA e Met (μg / ml) quando examinados em quantidade absoluta.
Os dados de hemolinfa Met (% TAA) obtidos em ambos os ensaios por meio de uma ANOVA de três fatores mostraram efeitos significativos devido à dieta, Tempo, e frequência de alimentação sem quaisquer efeitos de interação. O camarão alimentado com a dieta Met-Met apresentou níveis de hemolinfa Met significativamente mais elevados do que aqueles alimentados com a dieta basal ou DL-Met, enquanto os camarões alimentados com a dieta DL-Met apresentaram níveis mais elevados de Met do que aqueles alimentados com a dieta basal. Como detectado antes, O nível de Met (% TAA) na hemolinfa atingiu seu pico 15 minutos após a alimentação e foi significativamente melhor do que o observado em 0, 45 ou 60 min após a alimentação. Alimentar camarões três vezes ao dia resultou em um nível mais alto de Met na hemolinfa do que aqueles alimentados uma vez ao dia. A análise de dados com ANOVA de três fatores mostra claramente o aumento nos níveis de hemolinfa Met com a dieta Met-Met versus a dieta basal ou DL-Met em ambas as frequências de alimentação.
Geral, os resultados do estudo demonstram claramente que a alimentação com dieta suplementada com AQUAVI® Met-Met em comparação com a dieta suplementada com DL-Met resulta em maior Met (% TAA) na hemolinfa do camarão por um longo tempo. e assim, pode apoiar a síntese de proteínas corporais e melhor desempenho de crescimento. Este estudo in vivo fornece evidências para a maior eficiência biológica observada nos estudos anteriores para AQUAVI® Met-Met vs. DL-Met.
